VEGF特异siRNA重组腺病毒构建及其对K562细胞增殖的抑制作用

目的构建重组腺病毒Ad5-VEGFsi观察其抑制人红白血病K562细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达及其对K562细胞增殖抑制作用的影响。方法①合成针对人VEGF mRNA的特异性siRNA;将其插入穿梭质粒pSES-HUS,命名为pSES-VEGFsi;后者与腺病毒骨架质粒pAdEasy-l同源重组。酶切鉴定成功后,于HEK293细胞中包装、扩增,氯化铯超速梯度离心后得到滴度较高的重组腺病毒Ad5-VEGFsi;②Ad5-VEGFsi以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染K562细胞72h后,RT-PCR及ELISA方法检测VEGFmRNA及细胞培养液上清VEGF蛋白表达、MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果成功构建重组腺病毒Ad5-VEGFsi,氯化铯梯度离心纯化获得重组腺病毒滴度约4.6×1011pfu/ml;Ad5-VEGFsi感染K562细胞72h后,VEGF mRNA水平与对照组相比下降了66.55%(P<0.01),蛋白浓度下降了86.03%(P<0.01)。感染Ad5-VEGFsi后K562细胞生长明显受到抑制,且细胞的凋亡率也较对照组增加了13.89%(P<0.01)。结论重组腺病毒腺Ad5-VEGFsi可明显抑制人白血病K562细胞VEGF的表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。