未找到相关数据
凝血酶激活的单链尿激酶型纤溶酶原激活剂的构建、表达、纯化和性质研究
被引：5
作者：
张彦斌
徐长法
机构：
[1] 北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室
来源：
关键词：
单链尿激酶型纤溶酶原激活剂，凝血酶，构建，表达，血栓选择性;
D O I：
10.13865/j.cnki.cjbmb.1999.03.011
中图分类号：
Q55 [酶];
学科分类号：
071010 ;
081704 ;
摘要：
用Ｋｕｎｋｅｌ突变法，将单链尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｓｃｕ－ＰＡ）ｃＤＮＡ基因中编码Ｐｒｏ１５５—Ｌｙｓ１５８的片段定点突变，并将此突变的ｓｃｕ－ＰＡ（ｔｓｃｕ－ＰＡ）的ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｎｅｏ中，与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞．获得的稳定表达株在无血清培养基中２４ｈ的表达量为６２０ＩＵ／１０６细胞．经锌离子螯合Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析得到ｔｓｃｕ－ＰＡ纯品．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示ｔｓｃｕ－ＰＡ分子量为５３ｋＤ左右，与预期的结果相符．ｔｓｃｕ－ＰＡ是由凝血酶激活而不是由纤溶酶激活，但激活后也能转变为双链分子（ｔｃｕ－ＰＡ）．ｔｓｃｕ－ＰＡ仍保持了ｓｃｕ－ＰＡ的血纤维蛋白亲和性．酶动力学研究表明，激活后的ｔｓｃｕ－ＰＡ水解Ｓ２４４４的Ｋｍ和Ｋｃａｔ值与高分子量尿激酶（ＨＵＫ）相似．体外溶栓实验结果表明，ｔｓｃｕ－ＰＡ可以选择性地溶解富含凝血酶的血凝块，对贫凝血酶的血凝块作用不大
引用
收藏
页码：57 / 62
页数：6
相关论文