环介导等温扩增技术快速检测沙门菌

环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种在等温条件下高特异、高效、快速地扩增靶序列的DNA扩增新技术。以沙门菌(Salmonellaspp.)为研究对象,根据其特异性的invA基因,设计了一套特异性引物对该基因进行了LAMP,同时优化了其反应条件,建立了沙门菌的LAMP快速检测技术。结果表明,LAMP的最佳反应条件为外引物浓度5pmol/L、内引物浓度40pmol/L,Mg2+浓度6mmol/L,dNTP浓度0.8mmol/L,甜菜碱浓度0.8mmol/L,BstDNA聚合酶8U,反应温度63℃,反应时间1h。在此条件下,LAMP检测沙门菌DNA的敏感度达10fg/反应,且与其他常见的细菌无交叉反应。其对牛奶样品的检出量为102cfu/mL,适合于食品中污染沙门菌的快速检测。