建立了高效液相色谱与质谱联用法测定猪肉中5种青霉素类药物残留的方法。样品采用体积分数0.5%的乙酸提取,匀浆离心分离后通过XAD-2固相萃取柱净化,甲醇洗脱后,用质谱检测器检测。采用Agilent HC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mmi.d.,5μm),以体积分数0.1%NH3.H2O和乙腈为流动相进行梯度洗脱。在添加水平为0.1、0.2、0.5 mg/kg时,回收率在52%82.8%之间,相对标准偏差在3.4%9.2%之间,对于不同的药物,方法的检出限为0.001~0.005 mg/kg。该方法适合于猪肉组织中青霉素类药物残留量的检测。