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重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序
被引：30
作者：
刘新光
梁念慈
马涧泉
刘文
机构：
[1] 广东医学院医用生化研究所,中山医科大学生化教研室
来源：
基金：
广东省自然科学基金;
关键词：
人蛋白激酶CK2，β亚基，表达载体pT7－7，克隆，DNA测序;
D O I：
10.13865/j.cnki.cjbmb.1999.02.012
中图分类号：
Q785 [转化及克隆];
学科分类号：
071007 ;
0836 ;
090102 ;
摘要：
蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础．并为利用ｐＴ７－７表达载体构建其他重组质粒建立了一套成功的方法
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