山茱萸羟甲基糠醛对肿瘤坏死因子α致肝细胞凋亡的保护作用研究

目的从线粒体途径探讨山茱萸活性成分5-羟甲基糠醛对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和D-氨基半乳糖(DGal N)所致肝细胞凋亡的保护作用。方法体外培养人正常肝L02细胞,用TNF-α(100μg/L)和D-Gal N(44 mg/L)诱导肝细胞损伤模型,采用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞活力;流式细胞仪检测5-羟甲基糠醛对细胞凋亡的影响;Western-blot检测线粒体途径凋亡标志蛋白Apaf-1、AIF、cytochrome C、Bcl-2、Bcl-XL、Bax表达水平的变化;分光光度法检测Caspase-3、Caspase-9的活性。结果与TNF-α和D-Gal N模型组相比,不同浓度的5-羟甲基糠醛作用后,可显著减轻L02肝细胞的增殖抑制、降低细胞的凋亡率,并使促凋亡蛋白Apaf-1、AIF、cytochrome C、Bax的表达量明显下降,而使抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-XL的表达量显著上升,同时使细胞凋亡的关键蛋白酶Caspase-3、Caspase-9的活性显著降低。结论山茱萸羟甲基糠醛对TNF-α和D-Gal N所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与线粒体介导的凋亡通路以及BCL-2家族成员的表达调控有关。