抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性

目的 :建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisinB1,FB1)的酶联免疫吸附试验 (enzyme linkedimmunosorbentassay ,ELISA)检测方法 ,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒。方法 :利用B细胞杂交瘤技术 ,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。结果 :用伏马菌素B1 牛血清白蛋白 (FB1 BSA)偶联物免疫 8～ 10周龄雌性BALB/c小鼠后 ,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2 / 0融合 ,经过 3～ 4次亚克隆建立了 1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株 ,命名为 5A9。将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔 ,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水 ,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化 ,得到单克隆抗体。该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为 2 .5 6× 10 6,参考工作浓度为 3.2× 10 5。纯化后抗体的IgG含量为 10 .4g/L ,亲和常数为 8.3× 10 -8mol/L。该抗体与其他结构类似物无交叉反应 ,具有较高的特异性。结论 :制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体 ,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒。