轮状病毒VP4全基因的序列分析及其在原核系统中的初步表达

目的　研究轮状病毒（ＲＶ） 我国地方株ＶＰ４ 基因特点，并获得高效表达的ＶＰ４。　方法采用ＲＴ ＰＣＲ 技术扩增ＲＶＰ１Ａ 型我国地方株ＣＲ１８８ 的完整ＶＰ４ 基因，克隆到原核表达质粒ｐＥＴ２１ａ（＋ ）中：（１）用末端终止法进行核苷酸序列测定，并与人（ＨＲＶ）标准株作比较分析。（２） 重组质粒转化原核表达宿主菌Ｅ－ｃｏｌｉ ＢＬ２１（ＤＥ３） ，异丙硫半乳糖甙（ＩＰＴＧ） 诱导表达，经十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ ＰＡＧＥ） 和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 对其表达产物进行鉴定。结果　（１）ＣＲ１８８ ＶＰ４ 基因全长２３５９ｂｐ，含编码７７５ 个氨基酸的单一的开放读码框架（ＯＲＦ） ，与相同血清型标准株之间氨基酸序列具有高度同源性（９４ ％ ～９８％ ），与不同血清型标准株间相比较，则同源性较低（６４ ％ ～７８％ ） 。（２） 重组ＶＰ４表达量在诱导２～３ 小时时最高，占细胞总蛋白的１１ ％ ；表达蛋白与小鼠抗Ａ组ＲＶＶＰ４ Ｐ１Ａ型特异性单克隆抗体（ 单抗） 发生反应。结论　序列分析预测血清型的结果与临床标本的实验室诊断一致，ＣＲ１８８ ＶＰ４ 为Ｐ１Ａ型；ＶＰ４ 全基因在原核系统中获得表达，表达的重组ＶＰ４ 抗原可被型特