弓形虫特异DNA片段的克隆、顺序分析及体外基因扩增

<正> 本文首次建立了弓形虫（ZS2株）基因组文库,从中筛选出了一个含有弓形虫特异DNA顺序的克隆（1.1kh）,对克隆的片段进行了限制性内切酶图谱分析。用N13克隆和末端终止测序体系对部分片段进行了顺序分析,根据所得DNA顺序的数据设计并合成若干长度为19～20NT的特异的寡核苷酸引物对,并建立体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应方法。 反应体系:最终体积为50μl（10mM Tris,HCl,pH8.3,50mM KCl,2mM MgCl2,0.2mM dNTP,0.01％gelatin）;引物各330μg;样品DNA0.5～1μg;Taq DNA聚合酶2u;反应循环温度及时间为93℃,1min;55℃,1min;72℃,2min35周期;PCR产物用8％聚丙烯酰胺凝胶、2％或3％琼脂糖凝胶电泳;扩增产物预期的长度为199bp。