一种平末端连接的有效方法

转化效率与质粒大小成反比，而当质粒大于１５ｋｂ时，转化效率将成为限制因素，此时提高连接效率极为必要，特别是对于具有普遍性而效率又低的平末端连接。我们在连接反应体系中，加入相应的产生平末端质粒载体的限制性内切酶ＨＰａＩ、或ＥｃｏＲＶ，与不加ＨＰａＩ、或ＥｃｏＲＶ的连接反应相对照，连接产物转化大肠杆菌ＪＭ１０９后，产生的转化子比率分别为１９．９％和５．６％（ＰＦＰ７），３２．６％和９．７％（ｐＦＢ１７５），２４．３％和３．６％（ｐＦＨ１２），３７．９％和１０．３％（ｐＦＰ２６），且从转化株中分离的质＃ＤＮＡ经电泳、酶切鉴定为目的产物。ＨｐａＩ、或ＥｃｏＲＶ的存在极有利于插入片段连接到载体上，同时抑制载体自身环化或寡聚化，大大提高了平末端连接效率。