禽流感病毒重组核蛋白ELISA诊断技术的研究

用表达禽流感病毒 （AIV）核蛋白基因的杆状病毒感染Sf9昆虫细胞 ,以其表达产物制备抗原 ,建立了以杆状病毒系统表达的AIV核蛋白为抗原的禽流感间接酶联免疫吸附试验诊断技术 （rNPELISA）。其抗原最适包被量为 0 .6 μg/孔 ,待检血清最适稀释度为 1:2 0 0 ,酶标抗体使用浓度为 1:10 0 0。根据对 140份SPF鸡血清检测结果的统计分析 ,确定其判定标准为OD值大于 0 .15的血清样品为阳性。用rNPELISA检测 15 0份SPF鸡血清、194份非免疫鸡血清及 30份其它 15种鸡疫病阳性血清均为阴性 ;检测A型AIV15个不同亚型 （H1～H15 ）毒株的特异性血清均为阳性 ;对人工接种AIV的SPF鸡第 3天即能检出抗体 ,到第 16 2天试验结束时检测仍为阳性。其批内和批间重复试验的变异系数分别在 2 .9%～ 7.2 %和 3 .4%～ 9.8%之间。对3138份鸡血清进行监测 ,rNPELISA与全病毒间接ELISA（AIVELISA）、琼脂扩散试验 （AGP）及血凝抑制试验 （HI）的符合率分别为 99.9%、97.1%、98.8% ;并能 10 0 %检出AGP阳性及疑似、HI阳性的血清样品。试验证明 ,rNPELISA是检测A型禽流感病毒血清特异性抗体的一种特异、敏感、微量、快速、经济的血清学诊断技术