分子生物学方法在儿童流行性感冒监测中的应用

被引：3

作者：

朱汝南

钱渊

王芳

刘成贵

机构：

[1] 首都儿科研究所北京市感染与免疫中心研究室北京人类疾病基因诊断实验室,首都儿科研究所北京市感染与免疫中心研究室北京人类疾病基因诊断实验室,首都儿科研究所北京市感染与免疫中心研究室北京人类疾病基因诊断实验室,首都儿科研究所北京市感染与免疫中心研究室北京人类疾病基因诊断实验室,,,

来源：

中华流行病学杂志 | 2003年 / 01期

基金：

北京市自然科学基金;

关键词：

流感病毒; 多重逆转录-聚合酶链反应; 巢式-聚合酶链反应; 序列分析;

D O I：

暂无

中图分类号：

R181.3 [流行病学各论];

学科分类号：

100401 ;

摘要：

目的　建立一种能够快速、特异、有效地直接从临床标本中检测流行性感冒 (流感 )病毒并进行病毒型和亚型鉴别的方法 ,同时了解近年来北京地区A3型流感病毒血凝素重链 (HA1)区基因的变异特点。方法　根据编码A、B型流感病毒膜蛋白M基因的核苷酸序列设计两对引物 ,用于同一逆转录 (RT) PCR反应中 (多重RT PCR) ,根据A、B型毒株扩增产物的大小 (分别为 5 0 6bp和2 61bp)鉴别A、B型流感病毒。另根据编码A1 和A3型流感病毒糖蛋白HA基因的核苷酸序列设计两对引物 ,与B型M基因引物用于同一RT PCR反应中 ,可区分A1 、A3或B型流感病毒 (扩增产物分别为 944bp、10 72bp和 2 61bp)。为提高检测临床标本的敏感性 ,针对A1 和A3型病毒HA基因和B型病毒M基因又设计了 3对引物作为外侧引物 ,进行巢式 PCR反应。根据第二次PCR的扩增产物在 1.2 %的琼脂糖凝胶电泳中的大小即可确定型别。经PCR扩增 1996～ 2 0 0 2年间分离的北京地区A3型流感病毒株HA1区基因 ,测序并进行序列分析。结果　用上述多重RT PCR鉴定流感病毒分离株 15 6株 ,与血凝抑制试验阳性符合率为 10 0 %。用多重巢式 PCR检测 92份已经病毒分离确定为流感的儿科临床呼吸道标本 ,与病毒分离和血凝抑制试验阳性符合率分别为 76.9% (A1 型 )、5 7.1%(A3型 )、

引用

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[1] 用逆转录-聚合酶链反应鉴别甲型和乙型流感病毒感染 [J].