细菌随机扩增多态性DNA分析中模板提取方法的优化

目的 :筛选出最佳模板提取方法用于随机扩增多态性DNA(RAPD)。方法 :对 4种方法 (挑丝法、沉淀法、加热裂解法和裂解剂裂解法 )提取的模板DNA进行琼脂糖凝胶电泳、紫外线扫描及随机扩增多态性DNA ,比较其片段大小、纯度及RAPD指纹图差异。结果 :挑丝法和沉淀法均可提取出大于 2 3kb且纯度较高的模板DNA ,二者指纹图完全一致且均有 2～ 4kb的较大片段。加热裂解法和裂解剂裂解法提取的模板有弥散、碎裂的DNA并纯度较差 ,指纹图上仅有 6 0 0～ 2 0 0 0bp的较小片段。结论 :用挑丝法或沉淀法提取的模板DNA最适于进行RAPD。