对头孢吡肟敏感的疑似产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和克雷伯菌属的分子生物学特征题录附视频

目的了解初筛试验疑似产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)但确证试验未能确认,而对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属中的 ESBLs 和质粒介导的 AmpC 酶。方法纸片扩散法检测18株细菌对常用抗菌药物的敏感性;PCR 及多重 PCR 法检测细菌中的 ESBLs 和质粒AmpC 酶基因;质粒转移接合试验检测耐药质粒的可传递性;细菌基因间重复一致序列(ERIC)-PCR 法检测供体大肠埃希菌和受体 E.coli J53及其接合子的同源性;脉冲场凝胶电泳(PFGE)对11株大肠埃希菌和6株肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果 18株细菌均为2005年1月至12月期间上海华山医院临床分离的菌株,其中大肠埃希菌11株,肺炎克雷伯菌6株,产酸克雷伯菌1株,按常规方法对细菌进行重新鉴定和药敏试验。 18株细菌经美国临床和实验室标准协会(CLSI)推荐的 ESBLs 初筛试验结果均为 ESBLs 产生可疑菌株,但确证试验未能确认;所有菌株的头孢吡肟抑菌圈直径均在18 min 以上,显示敏感。PCR 检测结果显示,11株大肠埃希菌中有9株产 CIT 型质粒 AmpC 酶,DNA 测序及序列比对结果证实为 CMY-2型 AmpC 酶,未发现 TEM、SHV、CTX-M、PER、VEB、SFO 等广谱或 ESBLs;6株肺炎克雷伯菌中有5株产 DHA 型质粒 AmpC 酶,DNA 测序及序列比对结果证实为 DHA-1型 AmpC 酶;5株产 DHA-1型AmpC 酶的肺炎克雷伯菌株中,4株同时伴有广谱或 ESBLs:其中2株产 SHV-11型广谱酶,另2株分别产 CTX-M-14型 ESBLs 和 SHV-62型 ESBLs;1株产酸克雷伯菌亦单产 DHA-1型 AmpC 酶;质粒转移接合试验结果表明,携带耐药基因的质粒可从供体菌转移至敏感细胞中;PFGE 结果显示,6株肺炎克雷伯菌的谱型各不相同,而11株大肠埃希菌可分为5种谱型,其中 B 型包含7株细菌,这7株细菌均产生质粒介导的 CMY-2型 AmpC 酶,并分离自外科病房,提示可能存在克隆菌株的流行传播。结论在确证试验未能确认的疑似产 ESBLs 中,对头孢吡肟敏感的大肠埃希菌和克雷伯菌属细菌主要产生质粒介导的 AmpC 酶,但尚有少数菌株同时伴有产 ESBLs。对同时产生 ESBLs 和 AmpC 酶的菌株,临床微生物实验室必须报告这些菌株对头孢吡肟耐药。