PCR快速检测伪狂犬病病毒野毒感染

根据已发表的伪狂犬病病毒(PrV)gE、gI 基因的序列,设计并合成了一对引物,以 PrV 容 A 株细胞培养毒为模板,筛选最佳反应条件和试剂工作浓度,建立了区分 PrV 野毒株和疫苗弱毒的鉴别 PCR 方法。该方法能从 PrV 容 A 株(RA)、上海株(SH)、鲁 A 株(LA)中扩增出一条 848bp 的片段,但 Bartha–K61 株没有扩增出该片段。测序结果表明 PCR 扩增产物和方法的特异性。对正常细胞与其它 6 种引起猪病毒性疫病相关病毒进行检测,结果均为阴性,没有出现交叉反应。对 PrV 容 A 株细胞毒提取物 DNA 进行检测,其最低检出量为 5pg。PCR对感染野毒的发病猪不同组织器官检测发现,淋巴结检出率最高,依次为脾、脑(海马角)、肺、肾、肝等。对2003～2004 年期间江苏、浙江、安徽、福建、上海等省市的 37 个大中型猪场送检的 172 份病料进行 PCR 检测病料阳性率为 20.34%(35/172),猪场阳性率为 40.54%(15/37)。实验结果表明所建立的 PCR 技术可用于伪狂犬病野毒感染的快速鉴定和流行病学调查。