DNA测序法检测华法林用药剂量相关基因多态性的应用价值

目的评估分析DNA测序法检测华法林用药剂量相关基因——细胞色素氧化酶P4502C9（CYP2C9）和维生素K环氧化物还原酶（VKORC1）多态性指导华法林临床用药的价值。方法选取2011年7月至2012年7月武汉大学人民医院肿瘤科使用华法林经影像学和病理学检查确诊为肺癌患者140例,按检测CYP2C9和VKORC1基因且使用华法林（试验组70例）和不检测2个基因采取经验用药（对照组70例）分为2组,根据已知CYP2C9和VKORC1基因序列,设计针对CYP2C9和VKORC1基因多态性位点的特异性引物,PCR扩增包含CYP2C9和VKORC1基因多态性位点的DNA片段,并用DNA测序法验证;同时用DNA测序法检测试验组70例肺癌患者不同CYP2C9和VKORC1基因型的分布频率,且与对照组70例肺癌患者比较,以评价两组患者在使用华法林2周和4周后国际标准化比率（INR）的差异。结果 PCR产物凝胶电泳和DNA测序检测结果显示,针对CYP2C9和VKORC1基因的特异性引物可鉴别不同的基因型（CYP2C9*1、CYP2C9*2和CYP2C9*3;VKORC1-1639GG、VKORC1-1639AG和VKORC1-1639AA）,其检测的特异度和敏感度均为100%。除CYP2C9*1/*1患者INR为100%外,CYP2C9*1/*2、CYP2C9*1/*3、CYP2C9*2/*2、CYP2C9*3/*3和CYP2C9*2/*3均为0%。VKORC1-1639AG、VKORC1-1639AA和VKORC1-1639GG患者的INR分别为10%、90%和O%。采用基因型检测指导用药患者的INR值85.7%在第2周达到目标治疗范围,且明显高于对照组（48.6%,X2=21.9,P<0.01）;第4周试验组患者的INR值均达到目标治疗范围（100%）,对照组65例患者INR值达到目标治疗范围（92.9%）;但两组患者均未发生出血和血栓形成事件。结论设计针对肺癌患者华法林相关基因多态性的特异性引物,通过PCR扩增及DNA测序分析能快速、准确有效检测CYP2C9和VKORC1基因多态性,可靠地指导华法林在临床安全有效的使用。