产气荚膜梭菌α毒素双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用

为了对产气荚膜梭菌α毒素进行快速、有效的检测,本研究以单克隆抗体（monoclonal antibody,mAb）为基础,建立了双抗体夹心ELISA（double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA）方法。纯化原核表达的α毒素蛋白为免疫原,制备腹水型mAb并分离纯化作为检测抗体,免疫新西兰大白兔制备抗α毒素多克隆抗体纯化后作为捕获抗体,通过试验优化反应条件,建立标准曲线;并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。DAS-ELISA方法对α毒素的有效检测范围为5.86～375μg/L,最低检测线为4.57μg/L,比多抗-多抗双夹心ELISA具有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,AE型产气荚膜梭菌标准菌株的培养上清中,α毒素含量差异较大,A型菌（NCTC528）中α毒素含量显著高于其他菌型。本研究成功制备了高特异性的mAb,并建立了特异、灵敏、稳定的DAS-ELISA方法,为高效检测α毒素提供了有效工具。