松属树种种苗鉴定中AFLP指纹技术的研究(英文)

AFLP(扩增片段长度多态性)标记技术是高效而可靠的标记技术之一,特别对于那些基因组序列信息很少的物种更为有效。笔者对基因组较大的松属树种的AFLP实验程序进行了优化,提供了松树树种AFLP分析中DNA酶切、引物连接、预扩增及选择性扩增的优化实验程序。结果显示,预扩增反应中利用选择碱基数不同的预扩增引物(E/M+1,E/M+2)制备的模板对后续的选择性扩增结果没有显著影响;在选择性扩增反应中,对碱基数目选择进行了细致的优化,分别测试了15个E+3/M+3引物组合,6个E+4/M+3引物组合及15个E+3/M+4引物组合。对于有相同选择碱基数的引物,扩增结果随选择碱基的组合不同而有较大差异。据总的扩增结果发现,选择碱基增加时,扩增谱带数明显减少,谱带清晰度增加,即当选择碱基增加到E引物末端时(M+4/E+3),大多数引物组合的扩增谱带数要比选择碱基增加到M引物末端(E+3/M+4)的引物组合扩出的谱带数少且带型清晰。总体来看,E+4/M+3的引物组合比较适合于松属树种的AFLP分析。笔者还利用单株树种子的胚乳组织对AFLP标记的遗传方式进行了研究,在所用的两个引物组合获得的标记中,约有30%左右的分离标记,分离标记中偏分离比例约为6%。另外,选用3个松属树种对选出的14个AFLP引物组合进行的验证显示,这些组合在不同种间均获得了