H5N1亚型禽流感病毒HA基因核酸疫苗的构建及免疫效果研究

被引:1
作者
陈浩 [1 ]
刘明 [2 ]
刘春国 [2 ]
杨涛 [2 ]
李洪涛 [1 ]
杜金玲 [2 ]
孙恩成 [3 ]
机构
[1] 东北农业大学动物医学院
[2] 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所农业部动物流感重点开放实验室兽医生物技术国家重点实验室
[3] 黑龙江八一农垦大学
关键词
禽流感病毒; HA基因; 核酸疫苗; 免疫效力;
D O I
10.16437/j.cnki.1007-5038.2008.07.025
中图分类号
S852.659.5 [];
学科分类号
090601 ;
摘要
采用RT-PCR技术扩增了高致病性禽流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)HA基因,然后将其克隆到真核表达载体pCI-neo中,获得重组质粒pCI-HA。在脂质体介导下转染Vero细胞,单抗免疫组化IPMA结果表明,HA蛋白在VeroE6细胞上大量表达。pCI-HA质粒在有或无脂质体佐剂存在下以50μg剂量免疫接种Balb/c小鼠和SPF鸡,对照组只接种50μgpCI-neoDNA,各组以相同剂量加强免疫两次,每次免疫间隔3周。每次免疫前采集血清用ELISA检测抗体效价。最后一次免疫后3周用106EID50的高致病性流感病毒A/Goose/HLJ/QFY/04(H5N1)进行攻毒试验。免疫组小鼠抗体效价与对照组相比明显升高,但脂质体佐剂免疫组与非脂质体免疫组小鼠抗体效价差异不显著,基因免疫组小鼠能够抵抗H5N1高致病性禽流感病毒的致死性攻击。该核酸疫苗虽然能够诱导SPF鸡产生抗体应答,但抗体产生缓慢,效价较低。
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