RT-PCR法测定脂肪组织解偶联蛋白mRNA表达水平的探讨

目的：建立解偶联蛋白（ＵＣＰ）ｍＲＮＡ表达水平的竞争性ＲＴ－ＰＣＲ测定法；并应用该方法测定ＵＣＰｍＲＮＡ在成人腹膜内与腹膜外脂肪组织的表达水平。方法：应用剪接重叠延伸ＰＣＲ（ＳＯＥ－ＰＣＲ）合成中央缺失型ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ。ＵＣＰｍＲ－ＮＡ与作为内设标准的ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ用相同的引物在同一反应体系中进行逆转录反应和ＰＣＲ扩增。通过比较ＵＣＰｍＲ－ＮＡ产物和ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ产物的放射性信号强度求取ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平。结果：腹膜内与腹膜外脂肪组织样品中均检测到ＵＣＰｍＲＮＡ；ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平腹膜内脂肪组织为（６．８５３±４．２０７）ａｍｏｌ／ｆｍｏｌβ－ａｃｔｉｎ，腹膜外脂肪组织为（０．５２１±０．４９７）ａｍｏｌ／ｆｍｏｌβ－ａｃｔｉｎ（ｘ±ｓ）（Ｐ＜０．００１）。结论：本竞争性ＲＴ－ＰＣＲ方法测定脂肪组织ＵＣＰｍＲＮＡ表达水平灵敏、准确；ＵＣＰｍＲＮＡ在成人腹膜内与腹膜外脂肪组织均有表达，并且表达水平腹膜内脂肪组织高于腹膜外脂肪组织。