新预测的Ⅲ型分泌系统毒力蛋白Z3672的基因克隆、表达及纯化

目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌EHEC O157∶H7新预测毒力蛋白Z3672,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增出基因z3672,构建重组表达质粒,经测序证实后,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用质谱分析法和W estern印迹试验进行鉴定,通过洗涤包涵体纯化目的蛋白。结果:构建了pET-24 az-3672重组质粒,经酶切及测序鉴定与预期序列一致,实现了目的蛋白的融合表达,并且对蛋白条带的质谱分析证实了表达蛋白即为Z3672蛋白。纯化后目的蛋白的纯度>90%。结论:得到了新预测的毒力蛋白Z3672,为下一步研究蛋白功能,并进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。