应用多重聚合酶链反应法检测并鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌DNA

被引：8

作者：

李子玲

康晓明

杨毓华

罗文侗

叶曜芩

黄鹰

李学义

机构：

[1] 南京军区南京总医院老年病科,上海长征医院呼吸科,南京铁道医学院生物教研室,南京军区南京疗养院肺科

来源：

中华结核和呼吸杂志 | 1998年 / 09期

关键词：

聚合酶链反应,分支杆菌.结核,非结核分支杆菌;

D O I：

暂无

中图分类号：

R446.1 [生物化学检验、临床检验];

学科分类号：

100208 ;

摘要：

目的提高聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测分支杆菌ＤＮＡ的特异性和敏感性，以检测和鉴别结核分支杆菌与非结核分支杆菌ＤＮＡ。方法应用三对具有特异性的寡核苷酸引物，进行多重ＰＣＲ扩增。这三对引物分别对应于分支杆菌６５０００表面抗原、结核分支杆菌插入序列ＩＳ６１１０及人类β 珠蛋白基因的部分序列，其扩增产物分别为３８３ｂｐ、１２３ｂｐ和２６８ｂｐ。结果此多重ＰＣＲ电泳检测的灵敏度为０．６ｐｇ。经多重ＰＣＲ扩增后进行凝胶电泳，结核分支杆菌（人型、牛型结核分支杆菌、ＢＣＧ）均可见３８３ｂｐ、１２３ｂｐ片段，而非结核分支杆菌（鸟、龟、瘰疬、蟾、堪萨斯、胞内、耻垢分支杆菌）仅见３８３ｂｐ片段（猿分支杆菌与结核分支杆菌相同）。与上相比较，模拟分支杆菌感染的临床标本，分别增加了一条２６８ｂｐ片段。实验中用于对照的所有细菌及肺炎支原体ＤＮＡ，经多重ＰＣＲ扩增后电泳，均无上述特异性扩增片段出现。对１８２例临床标本进行培养、涂片和多重ＰＣＲ检测。７２例非结核性标本，三者均阴性；１１０例结核性标本中，三者阳性率分别为２．７％、１３．６％和３２．７％。结论多重ＰＣＲ方法可检测并鉴别结核分支杆菌及非结核分支杆菌ＤＮＡ（猿分支杆菌除外），具有高度

引用

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