目的研究14-3-3蛋白过表达对1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP+)诱导的PC12细胞死亡的影响作用及其可能的机制。方法构建pcDNA3.1(+)-14-3-3 真核表达质粒,用脂质体2000转染PC12细胞;Western blot技术检测PC12细胞中14-3-3蛋白、Bcl-2 蛋白, 和BAD蛋白的表达;然后分别用MTT法、酶标仪及流式细胞仪检测PC12细胞的活力、caspase的活性及PC12细胞的凋亡率。结果(1)将pcDNA3.1(+)-14-3-3质粒转染PC12细胞3周后,14-3-3蛋白的表达显著增加;(2)MPP+诱导PC12细胞存活率的下降是剂量依赖性的,当MPP+的浓度达100 μmol/L时,PC12细胞的存活率丧失约50%;(3)caspase 的活性随着MPP+浓度的增加而增高,当MPP+浓度到达100 μmol/L时caspase的活性也到达最大值,而当MPP+浓度超过100 μmol/L时,caspase的活性急剧下降;(4)用100 μmol/L 的MPP+处理PC12细胞24 h后,PC12细胞的凋亡率为26.5%,14-3-3蛋白的过表达使PC12细胞的凋亡率下降到8.6%;(5)用100 μmol/L MPP+处理PC12细胞后,Bcl-2蛋白的表达趋于下调而BAD蛋白的表达上调,14-3-3蛋白的过表达能显著的增加Bcl-2蛋白的表达而使BAD蛋白的表达下调。结论14-3-3蛋白过表达通过上调Bcl-2蛋白的表达并下调BAD蛋白的表达,减少了MPP+诱导的PC12细胞的凋亡,从而发挥对PC12细胞的保护作用。这些结果可能为PD的治疗提供新的药物靶点。
