水稻单倍体不定芽超低温保存和植株再生及其遗传稳定性研究

通过水稻单倍体幼穗离体培养 ,诱导形成了大量的不定芽。将 3 mm左右的不定芽转入半固体继代培养基继代培养 7d,而后转入 1 .8m L的安瓿瓶中 ,冰浴条件下加入预冻了的冰冻保护剂淹没材料 ,在冰上平衡 45～ 60 min后 ,转入程序降温仪 ,以 1 .0℃ / min的速率从 4℃降至 - 4 0℃ ,在 - 4 0℃停留 1 h后 ,投入液氮保存。将液氮保存 30 d左右的不定芽于 38～40℃的水浴中快速解冻 ,随即转入半固体的再生培养基 ,以待恢复生长并再生植株。结果显示 :经继代培养的不定芽超低温保存后的成活率为 2 1 %～ 2 9% ,再生出苗率为 1 4 %～ 1 8% ,而未经继代培养的不定芽超低温保存后的成活率仅为 8% ,且均不能再生成苗。继代培养基MS+蔗糖 3% +山梨醇 4%或马铃薯提取液 2 0 %均具有良好的继代培养效果 ,有效的冰冻保护剂为 1 0 % DMSO+0 .5mol/ L 山梨醇。对不定芽经液氮超低温保存的再生植株进行染色体镜检及 RAPD分析 ,结果表明再生植株在染色体倍性及 DNA水平上仍具有较好的遗传稳定性。