基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立

被引：15

作者：

陈立敏 ^{[1
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吕秋军 ^{[1
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Satoshi Inoue ^{[2
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卞广兴 ^{[1
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陈振花 ^{[1
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温利青 ^{[1
]}

机构：

[1] 军事医学科学院放射与辐射医学研究所

[2] 东京大学老年医学系

来源：

药学学报 | 2006年 / 08期

关键词：

雌激素; 雌激素应答序列; 分泌型碱性磷酸酶; 药物筛选; 报告基因; 免疫细胞化学;

D O I：

暂无

中图分类号：

R965.1 [药物筛选和实验模型];

学科分类号：

100706 [药理学];

摘要：

目的建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)亚型信号通路的药物筛选模型,以期发现ERβ亚型激动剂。方法构建带有雌激素应答序列(estrogen responsive elem ent,ERE)靶序列和报告基因的诱导性表达载体pTAL-ERE-SEAP,并将其转入人胚肾(HEK293)细胞中,筛选报告基因分泌型碱性磷酸酶(secretedalkaline phosphatase,SEAP)表达受雌二醇(17β-estrad iol,E2)诱导的阳性克隆。选取相关核受体配体进行模型的特异性考察,同时考察模型的稳定性及时效量效关系,以及免疫细胞化学染色鉴定转染后ERβ的表达情况。利用此模型对本实验室样品库中的2 622个化合物进行筛选。结果转染pTAL-ERE-SEAP的HEK293细胞中,SEAP报告基因的表达受E2的诱导并呈剂量与时间依赖关系,E2对阳性克隆细胞无增殖作用,本模型的Z′因子值为0.7,免疫细胞化学染色结果表明,转染后ERβ表达、地塞米松以及其他配体的诱导表达率低。结论利用此模型通过测定SEAP报告基因的诱导表达水平可筛选ERβ亚型激动剂。

引用

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