重组小鼠高迁移率族蛋白B1抗菌活性研究

被引:1
作者
龚薇
何凤田
高会广
李蓉芬
胡颖
机构
[1] 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室
关键词
高迁移率族蛋白B1(HMGB1); 原核表达; 抗菌活性;
D O I
10.16016/j.1000-5404.2006.09.025
中图分类号
Q51 [蛋白质]; Q78 [基因工程(遗传工程)];
学科分类号
071007 ; 0836 ; 090102 ;
摘要
目的:制备具有功能活性的重组小鼠高迁移率族蛋白B1(recomb inant mouse h igh-mob ility group box-1,rmH-MGB1)并观察其抗菌活性,为深入研究HMGB1抗菌功能创造条件。方法提取BALB/c小鼠脾脏总RNA,经RT-PCR扩增得到编码小鼠HMGB1的cDNA片段,序列测定正确后,构建于原核表达载体pQE-80L,转化于大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导表达目的蛋白,再经N i2+-NTA亲和层析柱纯化后,通过试管稀释法、琼脂扩散法两种抗菌实验观察并比较rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)、绿脓杆菌抗菌活性的差异。结果RT-PCR扩增得到了约648bp的cDNA片段,序列分析与GenBank中报道的编码小鼠HMGB1的cDNA序列一致,纯化后的rmHMGB1对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌(JM109、ATCC25922、DH5α)有明确的抗菌活性,其抗菌活性强弱依次为金黄色葡萄球菌>JM109>ATCC25922>DH5α,对绿脓杆菌则无抗菌活性。结论利用大肠杆菌可表达重组小鼠HMGB1,所获得纯化产物对部分细菌确有抗菌活性,此研究为进一步探讨HMGB1抗菌功能的机制奠定了基础。
引用
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