栝楼ISSR-PCR反应体系的建立和优化

被引：11

作者：

曲超 ^{[1
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孙群 ^{[1
]}

丁自勉 ^{[2
]}

王建华 ^{[1
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孙宝启 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国农业大学农学与生物技术学院,农业部基因组学与遗传改良重点实验室,北京市作物遗传改良重点实验室

[2] 中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所

来源：

基因组学与应用生物学 | 2009年 / 28卷 / 01期

关键词：

栝楼; ISSR-PCR; 正交设计; 体系优化;

D O I：

暂无

中图分类号：

S567.239 [];

学科分类号：

摘要：

用改良SDS法提取栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)叶片DNA为模板,通过单因素试验研究模板、引物、Taq DNA聚合酶和dNTPs等4因素各7个水平对栝楼ISSR-PCR扩增结果的影响,并通过正交试验对各因子的浓度进行优化,首次建立了栝楼ISSR-PCR分析的最适反应体系:20μL的反应体系中,1×buffer,模板含量为50ng,引物的浓度为0.5μmol/L,Taq DNA聚合酶的用量为0.8U,dNTPs的浓度为200μmol/L。随机选取10条引物验证体系稳定性,并对190条ISSR引物初筛,得到条带清晰、多态性好的引物126条。经验证,本实验所建立的栝楼ISSR-PCR反应体系具有稳定可靠、可重复性好、多态性较强等特点,能够较好的应用于栝楼的ISSR分子生物学分析。

引用

页码：127 / 131

页数：5

共 10 条

[1] 雌雄栝楼植株内含物比较研究 [J].