改良的降落PCR与普通PCR结果比较

被引：12

作者：

张贵星

袁保梅

许培荣

薛乐勋

机构：

[1] 郑州大学基础医学院生物工程实验室

[2] 郑州大学基础医学院生物工程实验室郑州

[3] 郑州

来源：

郑州大学学报(医学版) | 2003年 / 03期

关键词：

改良降落PCR; PFUDNA聚合酶; PCA特异性;

D O I：

10.13705/j.issn.1671-6825.2003.03.013

中图分类号：

R346 [];

学科分类号：

1001 ;

摘要：

目的 :设计并验证一改良的降落ＰＣＲ(ＭＴＤＰＣＲ)程序。方法 :自盐藻ｂａｒｄａｗｉｌ中提取基因组ＤＮＡ作为ＰＣＲ模板 ,使用ＴａｑＤＮＡ聚合酶及ｐｆｕＤＮＡ聚合酶 ,运用普通ＰＣＲ和ＭＴＤＰＣＲ程序 ,扩增胡萝卜素生物合成相关基因 (ｃｂｒ)上游启动子序列 ,并电泳比较ＰＣＲ扩增产物的特异性。结果 :使用普通Ｔａｑ酶进行ＰＣＲ ,普通ＰＣＲ程序产生 2 0 0ｂｐ , 50 0ｂｐ和 1 2 72ｂｐ的 3条带 ,而ＭＴＤＰＣＲ程序仅克隆出 1 2 72ｂｐ的特异带 ;利用高保真的ｐｆｕＤＮＡ聚合酶作ＰＣＲ ,在ＭＴＤＰＣＲ泳道中也仅有 1 2 72ｂｐ 1条带 ,而普通ＰＣＲ除了产生 1 2 72ｂｐ的特异带外 ,还出现 1条 50 0ｂｐ的非特异带。结论 :无论使用普通Ｔａｑ酶或高保真酶ｐｆｕ,改良的ＭＴＰＣＲ程序均明显提高ＰＣＲ的特异性 ,提示它可用于克隆普通ＰＣＲ难以克隆的基因片段 ,或在假阳性难以去除的情况下提高ＰＣＲ的特异性

引用

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