基于SYBR Green检测微小隐孢子虫的实时荧光定量PCR方法的建立及应用

被引:6
作者
陈甫 [1 ,2 ,3 ]
黄克和 [1 ]
机构
[1] 家畜疫病病原生物学国家重点实验室中国农业科学院兰州兽医研究所
[2] 南京农业大学动物医学院
[3] 青岛农业大学动物科技学院
关键词
实时荧光定量PCR; SYBRGreen; 微小隐孢子虫; 检测; 18srRNA;
D O I
10.13350/j.cjpb.2009.03.016
中图分类号
R382.3 [孢子虫];
学科分类号
摘要
目的建立一种方便快捷的检测微小隐孢子虫的实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法。方法根据GenBank公布的微小隐孢子虫18s rRNA基因序列设计1对引物,通过质粒DNA和卵囊检测标准曲线的绘制及特异性和重复性的研究,建立检测微小隐孢子虫的基于SYBR Green的Real-time PCR方法,进而对奶牛粪便进行检测。结果建立的Real-time PCR法对检测微小隐孢子虫具有很高的特异性,质粒DNA和卵囊的检测阈值分别达到1个拷贝和10个卵囊,奶牛粪便阳性率为25.93%(21/81),高于普通PCR检测率20.99%(17/80)。结论建立的Real-timePCR方法简便、快速,特异性强,敏感度高,可用于微小隐孢子虫的快速定量检测。
引用
收藏
页码:191 / 195
页数:5
相关论文
共 15 条
  • [1] 3种微小隐孢子虫卵囊检测方法的比较研究
    陈甫
    黄克和
    [J]. 中国病原生物学杂志, 2006, (05) : 352 - 355
  • [2] 从鼠粪中分离纯化微小隐孢子虫卵囊方法的研究
    陈甫
    黄克和
    [J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2006, (03) : 219 - 222
  • [3] 实时定量PCR研究进展及其应用
    阳成波
    印遇龙
    龚建华
    郁海
    黄瑞林
    李铁军
    [J]. 中国预防兽医学报, 2003, (05) : 76 - 80
  • [4] 犊牛隐孢子虫卵囊的分离与鉴定
    梁俊文
    黄克和
    [J]. 中国人兽共患病杂志, 2001, (06) : 62 - 63+136
  • [5] 应用PCR诊断隐孢子虫病
    李建华
    张西臣
    欧阳红生
    尹继刚
    杨举
    李德昌
    [J]. 中国兽医学报, 1999, (05) : 476 - 478
  • [6] PCR方法检测奶牛粪便中鼠隐孢子虫
    李培英
    周金林
    [J]. 中国兽医学报, 1999, (04) : 350 - 352
  • [7] 应用间接ELISA检测动物隐孢子虫病抗体
    黄克和
    李培英
    廖圣法
    ShiguangYangMarkC.Healey
    [J]. 中国兽医学报, 1999, (04) : 353 - 355
  • [8] 人体隐孢子虫病的国内外研究近况
    孟祥晶
    吴建平
    方祖贞
    [J]. 现代预防医学, 1997, (02) : 119 - 120+61
  • [9] 聚合酶链反应检测粪便中微小隐孢子虫
    马良
    陈雅棠
    刘约翰
    [J]. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 1996, (02) : 29 - 32
  • [10] Comparison of viability and infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts stored in potassium dichromate solution and chlorinated tap water[J] . Fu Chen,Kehe Huang,Shunyi Qin,Yuxin Zhao,Cuiling Pan.Veterinary Parasitology . 2007 (1)