人肿瘤坏死因子-α的免疫PCR检测方法

将PCR技术的极高灵敏度与ELISA技术检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)抗原的特异性相结合,利用生物素标记的腺病毒六邻体基因重组质粒(AdAT)作为PCR的模板DNA,以链亲和素(strep-tavidin)作连接分子,与生物素标记的兔抗鼠IgG抗体相连接,后者再与TNF-α的单克隆抗体结合。设计一对扩增六邻体基因的引物进行PCR,通过对DNA扩增片段浓度的定量分析,替代ELISA方法中的酶-底物显色反应而建立TNF-α的免疫PCR检测方法。结果表明,该技术灵敏度比ELISA方法灵敏10～3倍,可检出100fg/ml的TNF-α。借助此方法可检出脑脊液中极微量的TNF-α。