脱氧尿嘧啶核苷酸掺入量对尿苷酶抗污染效果的影响

被引:10
作者
杜绍财
吴娟
张敏
刘峰
韩建德
机构
[1] 北京大学人民医院肝病研究所
[2] 北京大学人民医院北京肝炎试剂研制中心
[3] 北京大学人民医院
基金
“九五”攻关项目;
关键词
聚合酶链反应; 尿苷酶; 丙型肝炎病毒;
D O I
10.13602/j.cnki.jcls.2001.06.009
中图分类号
R446.9 [其他];
学科分类号
摘要
目的 了解脱氧尿嘧啶核苷酸 (dUTP)掺入量与尿苷酶 (UDG)抗污染的关系。方法 通过聚合酶链反应将 5 0 %dUTP和全dUTP掺入HCVcDNA ,并观察UDG的抗污染效果。结果  0 0 5U、0 1U、0 2U的UDG 37℃消化 6 0min ,PAGE检测可抗 10 1~ 10 85 0 %dU DNA模板污染。 0 1UUDG 37℃ 10min能抗 10 6,2 0min~ 30min可抗 10 5,PAGE虽阴性 ,但DNA EIA杂交A值0 6 17,仍为阳性 ;40min可抗 10 3,未经杂交证实。 37℃消化 2 0min电泳检测可抗 10 1~ 10 8全dU DNA污染 ,DNA EIA杂交A值在 0 0 0 5~ 0 0 49均为阴性。结论 本文研究结果证实 ,用 5 0 %dU DNA为模板 ,37℃ 10~ 2 0min时 ,抗污染效果较差 ,需增加抗污染时间。应用全dU DNA为模板时 ,可获得良好的抗污染效果
引用
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页数:3
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共 2 条
[1]  
Preventing false positives: Quantitative evaluation of three protocols for inactivation of polymerase chain reaction amplification products. Rys R N,persing D H. Journal of Clinical Microbiology . 1993
[2]  
Use of uracil DNA glycosylase to control carryover contamination in polymerase chain reactions. Longo M C,Berninger M S,Hartley J L. Gene . 1990