健脾化瘀复方中药血清影响人肝癌BEL7402细胞增殖的作用

目的:观察健脾化瘀中药复方对人肝癌BEL7402细胞增殖的抑制作用,并与已知阳性药物5-氟尿嘧啶进行比较。方法:实验于2005-03/06在中山大学动物实验中心完成。①服药前及含药血清获得:健康志愿者1名(了解实验目的并签订知情同意书)空腹12h后按0.83,1.67,2.5mL/kg剂量口服健脾化瘀复方960合剂(由莪术、白术、苦参、白花蛇舌草等组成;广州市中医院提供;先将莪术、白术剪碎后用净水浸泡30min,提取挥发油和芳香成分,其渣再与用净水浸泡30min的苦参、白花蛇舌草等水煎提取水溶性成分,各种有效成分混匀制成口服液,每毫升相当于生药1.0g),分别于服药前、服药后1h抽取外周血液,得到服药前和含有健脾化瘀复方有效作用成分的含药血清。②观察服药前血清与小牛血清对BEL7402细胞的作用:分别将服药前血清和小牛血清(购于四季青公司)加入RPMI-1640培养液,血清终浓度50,100和200g/L。③观察药物血清对BEL7402细胞的作用:将人肝癌细胞BEL7402(引自中山大学动物实验中心)随机分为7组(每组细胞接种10孔):对照组(服药前血清加入RPMI-1640培养液,血清终浓度100g/L),5-氟尿嘧啶组[用含100g/L服药前人血清的RPMI-1640培养液配制,5-氟尿嘧啶(上海旭东海普药业有限公司,批号050106,规格10mL/支)终质量浓度为0.3,0.6,0.9mg/L]和健脾化瘀复方组(将按0.83,1.67和2.50mL/kg剂量服药后人血清加入RPMI-1640培养液,血清终浓度100g/L)。④人肝癌细胞增殖能力检测:用四甲基偶氮唑盐比色法检测人肝癌细胞增殖能力,以吸光度(A值)表示。计量细胞增殖抑制率[(观察组A值-对照组A值)/观察组A值]。结果:①相同质量浓度服药前血清与小牛血清对BEL7402细胞增殖能力影响比较,差异不明显(P>0.05)。200g/L服药前血清和小牛血清促进BEL7402细胞增殖能力最强,明显强于50g/L时(P<0.01)。②0.3,0.6,0.9mg/L5-氟尿嘧啶药物血清和1.67,2.50mL/kg健脾化瘀复方药物血清抑制人肝癌细胞增殖的能力和抑制率明显高于对照组(P<0.05～0.01),且药物血清浓度越高,对癌细胞增殖能力的抑制作用越强。1.67mL/kg健脾化瘀中药复方血清对人肝癌细胞增殖能力的抑制率与0.3mg/L5-氟尿嘧啶药物血清相近(30.0%,35.9%,P>0.05)。结论:①服药前人血清与小牛血清一样具有促进BEL7402细胞增殖的作用。②健脾化瘀中药复方具有抑制BEL7402细胞增殖作用,且呈剂量依赖性,其中中剂量(1.67mL/kg)含药血清对人肝癌细胞增殖抑制作用与小剂量(0.3mg/L)5-氟尿嘧啶相近。