成人骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为软骨细胞的实验研究

目的　建立临床成人骨髓基质干细胞 (MSCs)体外培养、定向诱导分化为软骨细胞的途径。方法　抽取成人骨髓 ,Percoll密度梯度离心法进行体外培养 ,贴壁细胞传代 ,取第 3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂地塞米松、维生素C和不同剂量转化生长因子 β(TGF -β) ,培养 16d后 ,在倒置显微镜观察细胞形态 ,甲苯胺蓝染色蛋白多糖 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT- PCR )、免疫细胞化学 (SABC法 )检测Ⅱ型胶原表达 ,诱导后MSCs与新型材料聚乳酸和羟基乙醇共聚物 (PL GA )复合。结果　Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSCs ;5、10ngTGF- β诱导分化的MSCs生长迅速 ,呈典型的软骨细胞形态 ,甲苯胺蓝染色阳性 ,Ⅱ型胶原表达阳性 ,MSCs对材料PL GA黏附力强。结论　可以从成人骨髓中培养出MSCs ,并可定向诱导分化为软骨细胞 ,5～ 10ngTGF- β为最佳诱导剂量 ,成人MSCs可用作临床自体软骨组织工程种子细胞。