基于DIG-化学发光法的Southern blot方法优化

被引：4

作者：

张晓 ^{[1
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张锐 ^{[1
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于源华 ^{[2
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史计 ^{[1
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孟志刚 ^{[1
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孙国清 ^{[1
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周焘 ^{[1
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郭三堆 ^{[1
]}

机构：

[1] 中国农业科学院生物技术研究所国家农作物基因资源与遗传改良重大科学工程

[2] 长春理工大学生命科学技术学院

来源：

生物技术通报 | 2011年 / 09期

关键词：

Southern blot; DIG标记; 化学发光法; 尼龙膜; 探针;

D O I：

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2011.09.039

中图分类号：

Q503 [生物化学技术];

学科分类号：

071010 ; 081704 ;

摘要：

目前,基于DIG-化学发光法的Southern blot技术已在生物实验室广泛应用,但在试验过程中经常会遇到背景黑、目的信号弱等问题,以致不能获得理想结果。在棉花线粒体基因组RFLP分析过程中结合前人经验对基于DIG-化学发光法的Southern blot技术在探针标记、探针浓度、探针剥离等方面进行了优化。优化后的方法重复性好,一张转好的尼龙膜最多可以反复使用11次;一份杂交液在两年内至少可以反复使用5次且不会明显降低杂交效果。

引用

页码：205 / 210

页数：6

共 7 条

[1]

Techniques et utilisations des marqueurs mo-leculaires. Bervillie A,Tressac M. INRA . 1995

[2]

Modified CTAB protocol using a silica matrixforisolation of plant genomic DNA. Huang J,Ge X,Sun M. Biotechniques . 2000

[3]

Optimization of non-radioactive Southern blot hybridization: single copy detection and reuse of blots. Allefs,J.J.H.M.,Salentjin,E.M.J.,Krens,F.A.,Rouwental,G.J.A. Nucleic Acids Research . 1990

[4]

The use of the nonradioactive digoxigenin chemiluminescent technology for plant genomic Southern blot hybridization: A comparison with radioactivity[J] . Gabriele Neuhaus-Url,Gunther Neuhaus. &nbspTransgenic Research . 1993 (2)

[5] Modified CTAB protocol using a silica matrix for isolation of plant genomic DNA [J].

Huang, JC ;

Ge, XJ ;

Sun, M .

BIOTECHNIQUES, 2000, 28 (03) :432-434

[6] 地高辛随机引物法标记探针的Southern杂交技术优化 [J].

周长发 ;

张锐 ;

张晓 ;

罗淑萍 ;

郭三堆 .

中国农业科技导报, 2009, 11 (04) :123-128

[7]

分子克隆实验指南[M]. 科学出版社 , (美)J.萨姆布鲁克(JosephSambrook),(美)D.W.拉塞尔(DavidW.Russell)著, 2002

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