多重实时荧光PCR快速检测沙门菌和单增李斯特菌

目的建立可同时检测沙门菌、单增李斯特菌的双重实时荧光PCR快速检测方法,并应用于食品样品的检测。方法根据GenBank上下载的沙门菌invA基因、单增李斯特菌hlyA基因的保守区序列分别设计特异性引物和TaqM an探针,建立并优化双重实时荧光PCR反应体系。对该方法的特异性、敏感性和稳定性进行评估,并应用于食品标本的检测。结果实验结果表明,该检测方法特异性强,对大肠埃希菌、志贺菌、副溶血性弧菌等其他病原菌进行检测均未产生交叉反应。对沙门菌和单增李斯特菌纯培养物的最低检出限分别可达10 cfu/m l和100cfu/m l;并且重复性好,变异系数均小于5%;对80份食品标本同时采用本文建立的双重荧光PCR方法和单重荧光PCR方法以及传统的分离培养方法进行检测,结果显示本文建立的双重荧光PCR方法对两种病原菌的检测效果明显优于单重荧光PCR方法以及传统的分离培养法,整个检测过程可在10 h内完成,包括前增菌所用的6 h。结论本研究建立的多重实时荧光PCR方法能同时对沙门菌和单增李斯特菌进行快速检测,并且灵敏度高、特异性好,可为食源性疾病的病原学快速检测提供新的手段。