肝细胞移植临床前研究:大鼠肝细胞分离、培养和逆转录病毒转导

目的建立完善的肝细胞培养系统，研究逆转录病毒载体转移并表达于大鼠原代肝细胞。方法采用表皮生长因子（ＥＧＦ）刺激大鼠原代肝细胞增殖，以表达β－半乳糖苷酶的双顺反子逆转录病毒载体（ｐＧＣＥＮ／β－ｇａｌ）感染肝细胞。Ｘ－ｇａｌ原位染色方法检测肝细胞内ＬａｃＺ的表达，采用ＰＣＲ方法扩增ＮｅｏＲ基因，从ＤＮＡ水平证实逆转录病毒载体整合入肝细胞。结果ＥＧＦ在体外可刺激肝细胞增殖并维持肝细胞功能，肝细胞表达β－半乳糖苷酶基因，肝细胞中可扩增出ＮｅｏＲ基因片断。结论双顺反子逆转录病毒载体可有效介导β－ｇａｌ和ＮｅｏＲ基因表达于大鼠肝细胞，提示可用于标记原代大鼠肝细胞，有利于研究肝细胞移植后移植之肝细胞在体内的寿命、分布及功能。