降低mRNA差异显示技术假阳性率的一种方法

被引：21

作者：

郝纯毅

赵敏

李勇

邢宝才

吕有勇

黄信孚

机构：

[1] 北京大学临床肿瘤学院,北京大学临床肿瘤学院,北京大学临床肿瘤学院,北京大学临床肿瘤学院,北京大学临床肿瘤学院,北京大学临床肿瘤学院北京,北京,北京,北京,北京,北京

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2002年 / 01期

关键词：

mRNA差异显示; 基因表达; 肝癌;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2002.01.028

中图分类号：

Q781 [目的基因的获得];

学科分类号：

摘要：

为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法 ,进一步提高此技术的可靠性 ,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA ,逆转录获得cDNA片段 ,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因 ,选取较明显的一条差异表达条带 ,行进一步PCR扩增 .分别对PCR产物及其经TA克隆后随机挑选的 6个单克隆质粒DNA进行序列分析 ,并通过GenBank BLAST数据库进行序列的同源性比较 ,以Northern杂交予以来源确认 .自 72 0余条扩增条带中共选出 2 8条差异条带 .序列分析及同源性比较表明 ,所选择条带的PCR产物为一可能的新基因片段 ;而随机选择的 6个TA克隆质粒DNA中 ,有 4个为同一已知基因片段 ,一个为另一已知基因片段 ,一个为一可能的新基因片段 .同源性比较表明 ,PCR产物直接测序所得序列与TA克隆质粒DNA的 6个片段不具同源性 .结果表明 ,mRNA差异显示条带可能由 1条以上分子量相似的片段构成 ,直接对PCR产物行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,是导致出现假阳性片段的原因之一 .将PCR产物进行TA克隆 ,对单克隆质粒DNA进行序列分析并以其为探针进行Northern杂交 ,可能是解决此问题的一种较好方法 .

引用

页码：110 / 114

页数：5

共 10 条

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