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马铃薯X病毒CP基因的原核表达及特异性抗血清的制备
被引：17
作者：
吴兴泉
陈士华
吴祖建
林奇英
谢联辉
机构：
[1] 福建农林大学植物病毒研究所
[2] 福建农林大学植物病毒研究所 福建福州
[3] 福建福州
来源：
关键词：
马铃薯X病毒;
外壳蛋白基因;
原核表达;
抗血清;
D O I：
10.16433/j.cnki.issn1673-2383.2003.02.006
中图分类号：
S435.32 [马铃薯（土豆）病虫害];
学科分类号：
090401 ;
090402 ;
摘要：
依据马铃薯X病毒(PotatovirusX,PVX)外壳蛋白(CP)基因序列(711bp)设计合成了两对引物,通过RT-PCR扩增得到长0.7bp的目的片段.将目的片段转入大肠杆菌,酶切鉴定证明得到了含有目的片段的重组子,测定序列结果与其他PVX分离物CP基因序列比较,发现其核苷酸同源性最高可达99%左右,证明此病毒为PVX.构建了含PVXCP基因的融合蛋白原核表达载体,并在大肠杆菌中得到表达,SDS-PAGE测定该融合蛋白GST-XCP的相对分子质量为52000.Westemblot分析结果显示,GST-XCP与PVX抗血清有很强的免疫反应,表明GST-XCP有天然状态下病毒核衣壳蛋白的抗原性.制备了GST-XCP抗血清,并利用此抗血清建立了PVX的间接ELISA检测方法,检测灵敏度为1mg鲜重的病株叶片.
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