线性探针分析法检测结核分枝杆菌rpoB耐药基因突变的研究附视频

目的　研制线性探针分析法检测结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因耐药突变试剂盒。方法　设计 15条结核菌rpoB基因野生型和突变型的线性探针 ,固定尼龙膜上 ;在rpoB基因引物上标记生物素 ,扩增结核菌DNA ,获得生物素标记扩增产物 ,与rpoB基因线性探针杂交 ,加入标记过氧化物酶的亲合素 ,再加四甲基联苯胺显色。结果　应用线性探针分析法检测 87株结核菌 ,其与rpoB基因直接测序法、传统药敏法符合率分别为 98 8% (82 / 83)和 94 3% (82 / 87)。结论　线性探针分析法检测rpoB耐药基因突变是一种操作简便、特异性高、敏感性高 ,易开展的方法。