绿色木霉的原生质体制备与转化条件

被引:11
作者
刘士旺
王政逸
郭泽建
机构
[1] 浙江大学生物技术研究所
[2] 浙江大学生物技术研究所 杭州
[3] 杭州
[4] 杭州中国农业大学农学与生物技术学院
[5] 北京
关键词
绿色木霉; 原生质体; 转化;
D O I
暂无
中图分类号
S476 [生物防治];
学科分类号
0904 ;
摘要
对绿色木霉(Trichodermaviride)原生质体制备和再生的条件进行了较详细的分析,并在此基础上进行了木霉的转化。结果表明,木霉原生质体形成的合适条件为:培养24h的菌丝用4mg/mL的Glucanex在磷酸盐缓冲液中(pH6.98)、30℃、振荡(40r/min)酶解4h,原生质体产量达到4.7×107个/mg。原生质体在0.3mol/L肌醇和0.3mol/LKCl的CM培养基上再生率为14.5%。对绿色木霉原生质体的激发子基因转化,其转化率为每微克DNA得到1~2个转化子。转化子的PCR鉴定以及激发子抗体的特异酶联免疫测定(ELISA)结果,表明外源基因已转入绿色木霉并有稳定产物表达。
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