大肠杆菌L－天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达

被引：14

作者：

刘景晶，李晶，吴梧桐，胡梅清

机构：

[1] 中国药科大学生物化学教研室，南京铁道医学院生物化学教研室

来源：

中国药科大学学报 | 1996年 / 11期

关键词：

大肠杆菌；L－天门冬酰胺酶Ⅱ；基因表达;

D O I：

暂无

中图分类号：

TQ464.8 [酶及辅酶];

学科分类号：

100705 ;

摘要：

用一对与大肠杆菌天门冬酰胺酶Ⅱ基因（ＡｎｓＢ）两侧序列互补的寡核苷酸Ｅ１，Ｅ２作引物，以大肠杆菌野生株ＣＰＵ２１０００９的染色体ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ扩增得到约１．２ｋｂ的ＤＮＡ片段，将此片段插入ｐＫＫ２３３－２的ｔａｃ启动子下游，转化不同的大肠杆菌宿主菌株，结果表明以ＣＰＵ２１０００９为宿主菌时，转化子的酶表达量最高，重组Ｌ－天门冬酰胺酶占菌体总蛋白４８．３％，发酵液酶活力达４００ＩＵ／ｍｌ；比活为４８ＩＵ／ｍｇ蛋白，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示纯化后的重组Ｌ－天门冬酰胺酶分子量与天然酶相同，均为１４０ＫＤ。

引用

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