人胚胎干细胞系的初步建立

目的　探讨用人受精卵建立人胚胎干细胞系。方法　将体外受精获得的人受精卵发育至胚泡期 ,用机械法去除胚泡透明带后 ,取出内细胞团 ,分散后接种在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上 ,进行传代培养。通过碱性磷酸酶染色、胚胎干细胞特异性表面标志物检测、染色体核型分析和严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠体内畸胎瘤形成实验 ,对连续传代的细胞进行鉴定。结果　 9枚受精卵在体外培养 5～ 7d后 ,5个存活并发育为胚泡 ,取出的内细胞团经接种培养 ,3个内细胞团存活 ,呈克隆性生长 ,发育为胚胎干细胞 ,并连续体外传代 7个月保持未分化状态 ,建系成功。 3个细胞系分别命名为CHE1、CHE2和CHE3。取 3个细胞系第 5、15和 30代的细胞进行碱性磷酸酶染色 ,均为阳性。对CHE3第 2 5、30、4 0代、CHE1和CHE2第 2 1、2 2、30代的细胞检测人胚胎干细胞表面标志SSEA 4、SSEA 3、TRA 1 6 0和GCTM 2 ,结果均为阳性 ;检测小鼠胚胎干细胞表面标志SSEA 1,结果为阴性。染色体核型分析为二倍体核型。将连续传代 5个月后 (30代左右 )的 3个细胞系接种到SCID小鼠体内 ,6周后均形成畸胎瘤 ,组织病理学检查显示含有 3个胚层的组织结构。结论　使用 5个人受精卵来源的胚泡 ,成功地在体外建立了 3个胚胎干细胞系 ,长期传代后仍保持胚胎干性和