常见腹泻病毒的多重荧光RT-PCR检测方法的建立及临床应用

目的建立能同时检测病毒性腹泻患者粪便中星状病毒(astrovirus)、A族轮状病毒(group A rotavir-us)、肠道腺病毒(enteric adenovirus)、诺如病毒GⅠ/GⅡ(norovirus GⅠ/GⅡ)的多重荧光RT-PCR方法。方法根据各病毒基因组保守性序列设计引物和探针,建立多重荧光RT-PCR检测方法。对建立的多重荧光RT-PCR方法进行特异性、敏感性及灵敏性实验,并使用该法对256份病毒性腹泻粪便标本进行检测,同时使用基因测序进行验证。结果成功建立常见腹泻病毒的多重荧光RT-PCR检测方法,对星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒以外的病原体不发生扩增反应。该法检测星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒、诺如病毒的灵敏度可达500copies/mL。256份标本中:星状病毒、轮状病毒、肠道腺病毒和诺如病毒阳性率分别为3.12%(8/256)、42.97%(110/256)9、.38%(24/256)和10.16%(26/256),与基因测序方法检测结果符合率达到100%。结论该多重荧光RT-PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于临床病原诊断。