人内皮细胞一氧化氮合酶红色荧光蛋白报告基因载体的构建与表达

目的　研究血管壁切应力诱导的人血管内皮细胞内皮细胞一氧化氮合酶 (eNOS)基因表达的调控机制 ,构建在哺乳动物细胞中表达的eNOS红色荧光蛋白报告基因载体。方法　从人脐静脉内皮细胞基因组DNA中克隆eNOS启动子 ,将其构建到红色荧光蛋白载体pDsRed1 1上 ,经PCR、酶切和DNA测序鉴定后将重组载体转染 2 93细胞 ,在荧光显微镜下观察其在细胞内的表达和分布情况。结果　PCR、酶切和DNA测序结果均表明重组载体pDseNOSRed的构建正确 ,该载体能在 2 93细胞中高效表达。由eNOS启动子驱动表达的红色荧光蛋白大部分均匀分布于整个细胞中 ,转染后 1 2h开始出现 ,36～ 48h为表达高峰 ,1 2 0h后红色荧光几乎全部消失。结论　成功构建了eNOS红色荧光蛋白报告基因载体 ,该载体能在哺乳动物细胞中高效表达 ,为研究血管壁切应力诱导血管内皮细胞eNOS基因表达的调控机制提供了一个重要而又方便的工具