自体富血小板血浆对游离皮瓣修复兔软组织缺损的影响

目的 探讨自体富血小板血浆(PRP)对游离皮瓣修复兔软组织缺损的影响。方法 取30只6个月龄、雌雄不拘新西兰大白兔,心脏采血后Aghaloo法制备PRP,于每只兔耳制作5 cm×3 cm的游离皮瓣模型。采用随机数字表法选择每只兔一侧兔耳作为PRP组,另一侧兔耳作为生理盐水组。PRP组兔耳皮瓣基底均匀涂抹1.0 mL自体PRP,生理盐水组涂抹等量生理盐水,皮瓣原位回植。分别于术后2、3、5、7、14 d,每组取6只兔,观察并记录兔耳皮瓣成活情况；取皮瓣组织,行苏木精－伊红染色观察皮瓣基底组织形态；采用免疫荧光法检测皮瓣基底组织的CD31和α平滑肌肌动蛋白(α－SMA)表达。另取1只同等实验条件下不制备皮瓣的6个月龄雄性新西兰大白兔,分别采集全血和制备PRP,行血小板计数及采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法检测血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子β(TGF－β)含量。对数据行析因设计方差分析、配对样本t检验及Bonferroni校正。结果 (1)术后2 d,PRP组兔创面皮瓣颜色彤红,与基底组织贴合良好；生理盐水组兔创面皮瓣颜色暗红,与基底组织贴合不良。术后3 d,PRP组兔创面皮瓣颜色红润,与基底组织贴合紧密；生理盐水组兔创面皮瓣散在斑状暗红,与基底组织贴合一般。术后5 d,PRP组兔创面皮瓣淡红,与基底组织贴合紧密,皮瓣已成活；生理盐水组兔创面皮瓣与基底组织贴合紧密,皮瓣颜色红润。术后7 d,PRP组兔创面皮瓣表面覆盖中量兔毛,皮瓣颜色与周围皮肤颜色接近；生理盐水组兔创面皮瓣与基底贴合一般,表面仅有少量绒毛覆盖。术后14 d,PRP组兔创面愈合良好,生理盐水组仍有小创面尚未愈合。(2)术后2 d,2组兔创面皮瓣均有炎性细胞浸润。术后3 d,PRP组兔创面皮瓣可见新生微血管,间质出血少；生理盐水组兔创面皮瓣新生微血管少。术后5 d,生理盐水组兔创面皮瓣中量炎性细胞浸润,新生微血管数量少；PRP组兔创面皮瓣可见大量Fb,少量炎性细胞浸润,明显可见周围散布新生微血管。术后7 d,生理盐水组兔创面皮瓣新生微血管数量较PRP组少。术后14 d,PRP组兔创面皮瓣新生微血管分化逐渐成熟,周围大量Fb分布；生理盐水组兔创面皮瓣部分新生微血管分化成熟,愈合过程较PRP组迟缓。(3)术后2、3、5、7、14 d,PRP组兔创面皮瓣基底组织的CD31和α－SMA表达量均明显多于生理盐水组(t＝10.133、5.444、9.450、6.986、8.394,14.896、10.328、9.295、13.902、10.814,P<0.01)。(4)活化后的兔PRP中血小板计数为(2 863±962)×109/L,明显高于全血中的(393±49)×109/L(t＝7.690,P<0.05)。(5)活化后的兔PRP中VEGF、TGF－β含量分别为(564.3±3.2)、(1 143±251)pg/mL,明显高于全血中的(99.7±0.4)、(274±95)pg/mL(t＝287.390、9.648,P<0.05或P<0.01)。结论 兔PRP中含有大量的VEGF与TGF－β,可以有效促进游离皮瓣组织微血管新生,加快游离皮瓣成活。