平颏海蛇碱性磷脂酶A2的融合表达、纯化及活性特征

被引：10

作者：

杨文利

钟肖芬

彭立胜

卫剑文

姜孝玉

叶兰汀

吴文言

徐安龙

机构：

[1] 中山大学生命科学学院生物化学系!海洋生物功能基因组开放实验室,广州,中山大学生命科学学院生物化学系!海洋生物功能基因组开放实验室,广州,中山大学生命科学学院生物化学系!海洋生物功能基因组开放实验室,广州,中山大学生命科学学院生物化学系!海洋生物功

来源：

中国生物化学与分子生物学报 | 2001年 / 04期

关键词：

平颏海蛇; 磷脂酶A2; 融合表达; 纯化; 细胞毒;

D O I：

10.13865/j.cnki.cjbmb.2001.04.006

中图分类号：

Q55 [酶]; Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

070307 [化学生物学]; 071007 [遗传学];

摘要：

将编码平颏海蛇碱性磷脂酶A2 的基因 (PLA2 9)克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pPETTRX的trxA基因的 3′末端 ,构建符合读码框的融合基因 .2 5℃下经IPTG诱导 ,该融合蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达 ,表达量达 2 0 %以上 .利用金属螯合亲和层析和凝胶过滤层析两步纯化 ,得到纯度 85%的融合蛋白 .经肠激酶切割和离子交换柱层析进一步纯化后 ,得到浓度 95%以上的成熟PLA2 9.对重组PLA2 9进行了Western印迹检测 .重组PLA2 9具有与天然PLA2 相近的酶活性 ;并具有对HL60等几种肿瘤细胞的细胞毒作用 ,这在海蛇PLA2 中是首次报道 .平颏海蛇碱性PLA2 融合表达及快速纯化系统的建立 ,为深入开展其结构与功能关系研究奠定了基础

引用

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