人DcR3融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

被引：2

作者：

吴春风 ^{[1
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马忠森 ^{[1
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王秀丽 ^{[2
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杨俊玲 ^{[1
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杨洋 ^{[1
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张越 ^{[1
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图们乌力吉 ^{[1
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乔俊华 ^{[1
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机构：

[1] 吉林大学第二临床医院呼吸内科

[2] 吉林大学第二临床医院血液内科

来源：

细胞与分子免疫学杂志 | 2007年 / 12期

关键词：

DcR3; 原核表达; 蛋白质纯化; 多克隆抗体;

D O I：

10.13423/j.cnki.cjcmi.004448

中图分类号：

Q78 [基因工程（遗传工程）];

学科分类号：

071007 ; 0836 ; 090102 ;

摘要：

目的:制备DcR3融合蛋白及其多克隆抗体,并鉴定其特异性。方法:将亚克隆构建的pET28a(+)/DcR3重组表达质粒转化入大肠杆菌(E.coli)BL21菌株,IPTG诱导表达,镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析蛋白产物,将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对其进行纯化及鉴定。结果:pET28a(+)/DcR3重组表达质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为33000的目的蛋白,表达量约占菌体蛋白总量的38%,纯化后的目的蛋白纯度达98%。Western blot显示纯化蛋白与抗DcR3单克隆抗体(mAb)具有良好的反应性。纯化后多克隆抗体效价达1.28×10-6。结论:DcR3蛋白在E.coli中得到高效表达,成功制备高纯度DcR3蛋白及高效价抗DcR3多克隆抗体,为研究DcR3在组织中的表达、分布,研制ELISA试剂盒以检测恶性肿瘤及自身免疫性疾病等患者血清DcR3表达水平提供实验基础。

引用

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