小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因腺相关病毒载体的构建

被引：2

作者：

王锁英 ^{[1
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许化溪 ^{[2
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王胜军 ^{[2
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黄新祥 ^{[2
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王文斌 ^{[3
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陈巧林 ^{[2
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马斌 ^{[2
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眭建 ^{[2
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姜旭淦 ^{[2
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胡嘉波 ^{[2
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机构：

[1] 江苏大学附属医院儿科

[2] 江苏大学检验医学研究所

[3] 江苏大学生命科学院

来源：

南京医科大学学报(自然科学版) | 2006年 / 03期

关键词：

T-bet; RT-PCR; 基因克隆; 重组质粒; 腺相关病毒载体;

D O I：

暂无

中图分类号：

R392 [医学免疫学];

学科分类号：

100102 ;

摘要：

目的:构建小鼠Th1细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体。方法:利用RT-PCR方法,从Balb/C小鼠脾细胞的mRNA中扩增T-bet基因全长cDNA,经测序证实后插入Pzac2.1质粒,用磷酸钙沉淀法,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞,包装成重组的病毒颗粒,并通过抽提病毒DNA进行PCR扩增鉴定重组病毒的形成,设立eGFP基因为对照。结果:1592bp的小鼠T-bet基因被成功克隆,分析表明,与Genbank中发表的序列相比具有99.8%的同源性。重组质粒Pzac2.1-T-bet的PCR及酶切鉴定表明T-bet基因被定向插入,与pAddeltaF6及p5E18质粒共转染293细胞包装成病毒后,经荧光显微镜和病毒DNA的PCR检测,证实已完成对重组病毒的包装。结论:成功构建了小鼠T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV-T-bet,为免疫紊乱性疾病的T-bet基因干预治疗奠定了基础。

引用

页码：184 / 188+225 +225

页数：6