苋菜凝集素基因的克隆及在转基因烟草中抗蚜性研究

被引：33

作者：

周永刚

田颖川

莽克强

机构：

[1] 中国科学院微生物研究所!北京,中国科学院微生物研究所!北京,中国科学院微生物研究所!北京

来源：

生物工程学报 | 2001年 / 01期

关键词：

千穗谷苋菜AHA基因; 转基因烟草; 抗蚜性;

D O I：

10.13345/j.cjb.2001.01.008

中图分类号：

Q789 [基因工程的应用];

学科分类号：

摘要：

通过PCR从苋属植物千穗谷 (Amaranthushypochondriacus)的总DNA中扩增出苋菜凝集素 (AHA)的核基因片段。序列分析结果表明该基因为 2 45 3bp ,含有一 15 38bp的内含子和两个分别为 2 12bp和 70 3bp的外显子。采取反向PCR的方法获得仅含该基因的编码区克隆。以此为基础与二元表达载体 pBin438构建含内含子与不含内含子AHA基因的植物表达载体 pBAHAg和pBAHAc并通过土壤农杆菌介导转化了烟草。转化再生植株的PCR和Southernblot分析表明 ,AHA基因已整合到烟草的染色体中 ,有单拷贝和多拷贝的整合。用与AHA蛋白高度同源的ACA蛋白的抗血清进行了免疫斑点 (Immunodotblot)检测 ,结果初步表明转基因烟草有AHA蛋白的表达。虫试结果表明转pBAHAg和 pBAHAc烟草对蚜虫的平均抑制率分别达 5 7 2 %和 48 8% ,有的高达 90 %以上。含内含子和不含内含子的AHA基因在转基因植株中的抗蚜性不同

引用

页码：34 / 39

页数：6

共 5 条

[1] 烟草β-1,3-葡聚糖酶cDNA克隆、大肠杆菌表达及植物表达载体的构建
蓝海燕
田颖川
张丽华
刘桂珍
王兰岚
陈正华
[J]. 生物工程学报, 1998, (04) : 62 - 68
[2] Transgenic Tobacco Plants With Efficient Insect Resistance
李太元
田颖川
秦晓峰
莽克强
李文谷
何永刚
沈蕾
[J]. Science in China(Series B), 1994, 37 (12) : 1479 - 1488
[3] 表达苏云金杆菌δ-内毒素基因的转基因烟草的抗虫性[J]. 田颖川,秦晓峰,许丙寅,李太元,方荣祥,莽克强,李文谷,符文俊,丽一平,张书芳,谢强江.生物工程学报. 1991(01)
[4] 微生物遗传学实验技术[M]. - 科学出版社 , 贾盘兴等编著, 1992
[5] Sambrook,J,Fritsch,EF,Maniatis,T. Molecular Cloning: A laboratory Manual . 1989

← 1 →