基于牛源布氏杆菌重组膜蛋白的胶体金免疫层析试纸条的研制

为研制一种快速检测牛源布氏杆菌的免疫层析技术,本研究对牛布氏杆菌外膜蛋白omp22进行表达纯化,并用新西兰大白兔制备omp22多克隆抗体,将omp22蛋白作为胶体金标记物,家兔抗牛Ig G用于检测线,多抗用于质控线,制备了胶体金免疫层析检测抗体试纸条。结果显示,成功诱导表达大小为74 ku的可溶性重组蛋白omp22,且纯化后的重组蛋白omp22的浓度为2 mg/m L,纯度在85%以上;该胶体金试纸条在阳性血清稀释至1∶64时仍可见清晰条带;与牛结核、牛蓝舌病、牛病毒性腹泻、牛口蹄疫、牛巴氏杆菌病、牛地方流行性白血病阳性血清均无交叉反应;与国外商品化试剂盒比较,试纸条检测结果与ELISA检测试剂盒(IDEXX)的符合率为94.2%(49/52),与牛羊布病抗体检测卡(KERNEL)的符合率为96%(49/50)。整个检测过程可在10 min内完成,肉眼即可判断。以上结果表明,该试纸条具有良好的重复性、敏感性和特异性,可适用于牛源血清中布氏杆菌病抗体的现场快速检测和筛选工作。